毛细管电泳仪分离条件的九步选择流程

　　毛细管电泳原理及分析策略一、毛细管电泳的基本原理电泳是指电解质中带电粒子在电场力作用下，以不同的速度向电荷相反方向迁移的现象。毛细管电泳（HPCE），是指离子或带电粒子以毛细管为分离室，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间迁移速度和分配行为上的差异而实现分离的液相分离分析技术。由于毛细管内径小，表面积和体积的比值大，易于散热，因此毛细管电泳可以减少焦耳热的产生，这是与传统电泳技术的根本区别。

　　毛细管电泳仪突出的优点：

　　（105TP/m-107TP/m）、快速（几十秒至几十分钟）；

　　分离模式多，选择自由度大；

　　分析对象广，小到无机离子大至整个细胞，具有“”分析功能或潜力。

　　操作可高度自动化；

　　样品与试剂消耗量小，运转费用低，无环境污染问题。

　　毛细管电泳仪分离条件选择的流程

　　分离条件的选择是毛细管电泳中z重要但也是z难之处。不同的专业研究工作者可能会有各自不同的选择策略和流程，我们提出如下九步选择流程，仅供参考：

　　第1步，尽可能多地了解分离样品的类型、来源、组成及其性质；

　　第二步，根据样品的可能性质和来源，选择分离模式，若无样品信息可先选CZE；

　　第三步，根据样品性质确定检测方法，一般先选直接紫外吸收；

　　第四步，确定样品处理方式，包括衍生方案以及离心过滤除蛋白等；

　　第五步，根据样品解离常数计算z佳pH，或利用75µmID毛细管和磷酸缓冲体系确定pH范围;

　　第六步，根据所需pH构建缓冲体系，包括进一步优化pH、缓冲试剂浓度等；

　　第七步，优化其他操作参数，如毛细管尺寸、分离电压和温度等；

　　第八步，确定是否需要使用添加剂和使用非水溶剂；

　　第九步，确定是否需要换用其他分离模式。

　　在毛细管电泳条件选择中，还应充分注意下列操作事项：

　　①对样品和缓冲液进行过滤或离心处理。

　　②毛细管的洗涤或平衡，与缓冲体系、pH以及柱子有关。磷酸根与石英和玻璃之间存在慢相互作用，需要延长平衡或冲洗时间，处理的时间应由分离重现性决定。

　　③欲降低缓冲液的电导，应尽量使用所谓的“生物缓冲试剂”；欲降低检测背景，则应尽量使用无机缓冲试剂。

　　④欲保持分离重现，要尽量采用相同的条件，包括毛细管、缓冲液、温度、电压、洗涤等。

　　以上便是今天关于毛细管电泳仪分离条件的九步选择流程的全部分享了，希望对大家今后使用本设备能有帮助。