毛细管电泳仪是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平,不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能,也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。
毛细管电泳仪分析对进样技术要求很高,进样操作事项如下。
一、进样区带越小越好:
无论采用何种进样方式,毛细管插入样品溶液的深度一般要少于毛细管总长度,以尽量减少样品溶液经毛细吸附进入毛细管而影响进样量的性。
二、进样时间以短为宜:
通常进样时间,此时毛细管粘附的样品量相对于吸入的体积可忽略不计。
虽然毛细管电泳的进样时间可,但由于毛细管插入样品管时不可避免地会粘附一些溶液,进样时间过短会影响分析的重复性。
三、样品预浓缩:
受毛细管内总体积的制约,对于浓度很稀的样品,毛细管电泳不能象HPLC那样可加大进样量来提高检测灵敏度,但可采取一些措施来改善。
1、当样品缓冲液的电导明显低于电泳缓冲液时,毛细管两端加上电压后可在样品区带前后形成一个更大的电场,使样品溶液中的分子迁移的更快。当这些分子到达电泳缓冲液边界时,由于电场减弱,迁移速度减慢,使样品区带由宽变窄,浓度提高,而达到浓缩的目的。
2、当样品缓冲液和电极缓冲液的电导一样,而样品浓度较稀,不适合再作稀释时,可在进样前先吸入一些水,也能达到浓缩的目的。
无论采取何种进样方式,上述方法都可使样品堆积浓缩。但由于在堆积区带电势陡降,会导致此区带温度升高。
四、毛细管插入样品溶液后,应立即开始进样操作,完成后迅速移至缓冲液中开始电泳。否则会产生毛细作用和虹吸现象,引起误差并使谱带展宽。
五、电极不要和毛细管接触,样品贮器和缓冲液贮器液面的高度应保持平衡。
六、使系统尽可能保持恒温。因温度直接影响粘度,而影响进样量的恒定。
七、样品溶液中的溶剂必须与缓冲液互溶,前者的离子强度应低于后者。
八、防止样品溶液和缓冲液蒸发、损耗。